27 березня, 2015

Ежедневное употребление молока, ферментированного лактобактериями Lactobacillus casei DN114001, повышает врожденный иммунитет у здоровых людей среднего возраста

Эффективность иммунной системы в процессе старения снижается, что выражается в ослаблении сопротивляемости заболеваниям и сокращении продолжительности жизни. Этот биологический процесс, определяемый как «старение иммунной системы», может в какой-то степени замедляться благодаря употреблению пробиотиков, а именно молочнокислых бактерий, обладающих иммуномодулирующим и противоопухолевым действием.
В связи с этим было проведено исследование, посвященное изучению влияния потребления молока, ферментированного лактобактериями Lactobacillus casei DN114001*, на пищеварительную и иммунную системы в группе населения среднего возраста. Положительный эффект того или иного штамма пробиотиков, вероятно, обусловлен взаимодействием бактерий со слизистой оболочкой, что и ведет к специфическим изменениям в образовании цитокинов. Кроме того, молочнокислые бактерии высвобождают биологически активные пептиды, которые в свою очередь могут модулировать иммунный ответ на уровне клетки.
Таким образом, некоторые штаммы молочнокислых бактерий оказывают положительное влияние на здоровье, повышая тонус иммунной системы организма посредством стабилизации микрофлоры, однако окончательное заключение по этому вопросу еще не сделано.

Цель исследования – установить влияние потребления молока, ферментированного лактобактериями Lactobacillus casei DN114001, на иммунные функции организма здоровых людей среднего возраста.

Материалы и методы
Участники эксперимента
В исследовании приняли участие 45 здоровых добровольцев (24 женщины и 21 мужчина) в возрасте от 51 до 58 лет, которые были обследованы на кафедре физиологии и питания Университета Наварры. Все участники имели хорошее здоровье, что подтверждалось их историями болезни, физическими данными и общими гематологическими и биохимическими анализами.
Все пациенты дали официальное письменное согласие на участие в данном экспериментальном исследовании, которое предварительно было одобрено местным Комитетом по медицинской этике.
Главными критериями включения участников в исследование были отсутствие заболеваний эндокринной системы, кишечника и иммунной системы в настоящее время и в анамнезе; отсутствие нарушений жирового обмена (дислипидемии) и признаков ожирения (индекс массы тела <30 кг/м²). Кроме того, на момент начала исследования участники не должны были подвергаться лечению препаратами, воздействующими на желудочно-кишечный тракт и иммунную систему, а также придерживаться какой-либо диеты.

Дизайн исследования
Исследование являлось рандомизированным двойным слепым плацебо контролируемым. Началу исследования предшествовал 3-недельный «отмывочный» период, в течение которого добровольцы не употребляли ферментированного молока и были распределены на 2 группы для проведения медицинского эксперимента в течение 8 нед. Пациентам группы А назначали в день три чашки (по 95 г) молока, содержащего лактобактерии Lactobacillus casei DN114001 (10⁸-10¹⁰ КОЕ/г), а участники группы B получали плацебо (молоко, не содержащее пробиотиков) в той же дозировке. Чашки имели одинаковые размеры и вид, были помечены этикетками с номерами добровольцев, которые каждую неделю в течение всего эксперимента получали продукт, хранившийся при температуре 4°C. Исследователи были обязаны периодически в ходе регулярных посещений наполнять чашки. Добровольцев опрашивали, как они выполняют требования исследования и нет ли проблем со здоровьем, которые могли бы быть связаны с потреблением продукта. Потребление ферментированного молока в рационе питания контролировалось с целью оценки специфического влияния пробиотика именно на иммунную систему. Оценивались пищевой статус и иммунологические показатели до начала исследования (0-й день) и по окончании 8-й недели эксперимента (на 56-й день); кроме того, проводился подсчет лейкоцитов по истечении 3 нед эксперимента (на 21-й день) с целью выявления возможных изменений в их составе.

Анализы крови
Для исследования выполняли забор крови из периферической вены натощак и сразу же подвергали ее обработке и анализу. С помощью автоматизированных методов в сыворотке крови определяли концентрацию белка, глюкозы, триглицеридов и холестерина; регистрировали гемограммы и подсчитывали количество лейкоцитов. Были проанализированы субпопуляции лимфоцитов на проточном цитометре и с помощью моноклональных антител по отношению к зрелым Т-лимфоцитам (CD3+), активированным Т-лимфоцитам (CD3+ HLA- DR+), В-лимфоцитам (CD19+), Т-хелперам (CD3+ CD4+), Т-супрессорам (CD3+ CD8+) и естественным киллерам (CD3- CD16+ CD56+). Оценивали «респираторный взрыв» моноцитов и гранулоцитов на проточном цитометре, их активность определяли методом измерения средней интенсивности флюоресценции (СИФ). Противоопухолевую активность естественных киллеров оценивали объективным методом измерения лизиса клеток К562, меченых Cr⁵¹ с коэффициентом эффективности 3:1, 6:1, 12:1, 25:1 и 50:1. Радиоактивность, появлявшуюся в процессе лизиса, измеряли на приборе.

Статистический анализ
Для анализа нормального распределения переменных использовали критерий Шапиро-Уилка. Сравнение переменных до и после исследования осуществлялось с помощью парного t-критерия Стьюдента. Результаты считались статистически значимыми, если двусторонние значения p были <0,05. Статистический анализ выполняли с помощью программного обеспечения.

Результаты и обсуждение
Все добровольцы завершили исследование и не сообщали о каких-либо изменениях в состоянии здоровья, связанных с потреблением продукта в течение эксперимента. Параметры питания и веса всех участников эксперимента находились в пределах нормы в начале исследования; после окончания эксперимента ни у кого из участников обеих групп также не было обнаружено каких-либо изменений указанных и биохимических параметров. В общем количестве лейкоцитов, так же как и в концентрациях различных субпопуляций лейкоцитов, не было выявлено изменений в интервале между днем включения в исследование, 21-м днем, когда было выполнено контрольное измерение, и днем окончания исследования (56-й день). Также на протяжении исследования не было выявлено статистически значимых изменений в количестве (в процентном соотношении) различных субпопуляций (табл.).
Изменение активности лимфоцитов (естественных киллеров) после экспериментальной диеты оценивалось по проценту специфического лизиса клеток-мишеней К652 с распределением по пяти показателям эффективности: 50:1, 25:1, 12:1, 6:1 и 3:1 (рис.). Данные представлены в виде среднего и полученного по формуле среднеквадратичного отклонения, статистически значимые приращения с p<0,05 (NS указывает на p>0,1).
Согласно полученным данным в результате диеты с пробиотиком (p=0,831) или плацебо (p=0,408) не выявлено изменений в концентрациях гранулоцитов со способностью к окислительному взрыву. Также в субпопуляциях гранулоцитов не наблюдалось изменений интенсивности «респираторного взрыва», связанного с употреблением пробиотика (p=0,124) или плацебо (p=0,831). Не обнаружено изменений в концентрациях моноцитов с окислительной активностью после приема пробиотиков или плацебо, но наблюдалось статистически значимое увеличение способности к окислительному взрыву (p=0,021) после получения диеты с пробиотиком (табл.). Фактически противоопухолевая активность естественных киллеров увеличилась после исследования (рис.) и достигла статистически значимого уровня показателя естественных киллеров относительно опухолевых клеток 12:1 (p=0,042) и 25:1 (p=0,023).
Прогрессивное снижение иммунной функции, развивающееся с возрастом, связано со снижением сопротивляемости заболеваниям и уменьшением продолжительности жизни. По результатам различных исследований предлагается использование некоторых пробиотиков, тормозящих снижение иммунного статуса, связанное со старением. С другой стороны, пожилые люди настолько обеспокоены состоянием своего здоровья, что готовы вырабатывать новые привычки, которые могли бы помочь им сохранить хорошее здоровье. Этот факт наравне с увеличением продолжительности жизни в Европе превратили пожилых людей в поборников потребления продуктов, полезных для здоровья. Продукты, содержащие пробиотики, оказывают несомненную пользу для здоровья людей. Примером может служить способность штаммов лактобактерий Lactobacillus casei к иммунномодуляции, проверенная на животных. Тем не менее необходимо проведение клинических испытаний, которые должны определить, как именно пробиотики влияют на здоровье людей. Исходя из этого, целью настоящего исследования являлось изучение воздействия потребления йогуртов, содержащих лактобактерии L. casei DN114001, на иммунную систему группы населения среднего возраста.
Полученные результаты исследования свидетельствуют об отсутствии неблагоприятного воздействия молочных продуктов, использовавшихся в ходе исследования, и характеризуют состояние здоровья участников по окончании эксперимента как хорошее. Кроме того, было проанализировано состояние участников в зависимости от возраста и пола, а также контролировалось отсутствие инфекционных и аллергических состояний с целью адекватной оценки иммунологических показателей.
Стабильность распределения субпопуляций лейкоцитов (лейкоцитарной формулы) в течение всего эксперимента подтверждает отсутствие субклинических процессов, которые привели бы к исключению добровольцев из эксперимента, а также стабильность концентраций иммуноцитов на фоне ежедневного употребления йогурта с лактобактериями L. casei DN114001, что противоречит выводам об изменениях концентраций субпопуляций лейкоцитов, которые наблюдались в экспериментах со штаммами других молочнокислых бактерий.
Ранее было отмечено, что с возрастом развивается дисфункция иммунной системы, которая отражается на концентрациях иммуноцитов, но не было выявлено количественных изменений, связанных со старением иммунной системы. Врожденная иммунная система проходит через эти изменения, отчасти обусловленные износом сигнальной межклеточной системы, связанным со старением. Исходя из этого, макрофаги обладают меньшей способностью к разрушению бактерий, а естественные киллеры уже не могут так легко уничтожать опухолевые клетки. Несмотря на то что некоторые люди имеют несомненно хорошее здоровье с высоким иммунным статусом и после 50 лет, иммунная система многих людей вследствие старения реагирует на инфекции иначе. На основании этого положения проверено воздействие ежедневного потребления йогурта, ферментированного лактобактериями L. casei DN114001, на «респираторный взрыв» моноцитов и противоопухолевую активность естественных киллеров. Наблюдаемый в ходе эксперимента эффект от потребления пробиотика в обоих случаях оказался положительным.

Вывод
Полученные результаты указывают на то, что ежедневное употребление молока, ферментированного лактобактериями Lactobacillus casei DN114001, способно приводить к активации механизмов неспецифического иммунитета в организме людей среднего возраста, иммунная система которых с большой вероятностью подвержена старению. Поэтому употребление этого пробиотического продукта может рассматриваться в качестве одного из методов уменьшения нарушений иммунной системы, свойственных здоровым людям среднего возраста, так как он обладает способностью влиять на их иммунную систему.

* Лактобактерии Lactobacillus casei DN114001 (L.casei Imunitass^®) содержатся в кисломолочном продукте Actimel (Данон).

J Psychol Biochem 2004

Номер: № 15-16 Серпень - Медична газета "Здоров’я України"